1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
文 献 综 述1.酿酒酵母表达外源蛋白质酿酒酵母是食品级安全性的模式微生物，由于其具备易培养、繁殖快、便于基因操作等优点，因此成为极具潜力的底盘细胞。
此外，酿酒酵母还具有高效的蛋白质分泌能力，渐渐被开发作为外源基因的表达系统，是工业生物技术中蛋白表达的平台微生物之一。
酿酒酵母具有完善的蛋白分泌途径及翻译后修饰系统，有利于保持真核源分泌蛋白的天然生物学功能，是异源蛋白生产极具潜力的底盘细胞[1]。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
（1）主要研究内容：本课题拟构建一株可表达人表皮生长因子（hEGF）的酵母细胞重组菌，将载体用于发酵过程中固定细胞，采用基于生物被膜的固定化技术，实现人表皮生长因子连续化生产的应用。
（2）拟采用的研究手段：技术路线：1. 通过文献检索，整理菌株培养及发酵方法；2. 构建并验证可分泌人表皮生长因子的质粒； 3. 利用电转化技术构建重组菌及表达人表皮生长因子； 4. 构建固定化连续化发酵，测定相关数据。
研究方案：1. 构建并筛选重组菌株：构建可分泌人表皮生长因子的质粒，并利用电转化将其转入酿酒酵母中，通过酶切及核酸凝胶电泳验证是否转化成功，送去公司测序验证正确后进行扩培保菌；2. 人表皮生长因子的分泌表达：将保藏菌进行活化、种子液培养至进行分批发酵，其中每隔24 h取样2 ml发酵液，测定其生长OD600值与蛋白浓度。
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