1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
犬巴贝斯虫病是由巴贝斯科巴贝斯属的犬巴贝斯虫(Babesia canis)、吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)、韦氏巴贝斯虫(B.vogeli)引起的一种血液原虫性疾病。
巴贝斯虫主要寄生在犬的红细胞中。
它的临床表现为发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿、少食、精神不振、可视粘膜苍白、精神沉郁甚至嗜睡,具有病程短,死亡率高的特点。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题1. 研究目标优化DNA提取方法,优化PCR反应条件,最终实现巴贝斯虫PCR快速检测。
2.研究内容2.1 DNA提取方法优化采用两种方法提取DNA,一种用蛋白酶K和苯酚提取高分子量DNA,另一种哺乳动物DNA的快速分离方法,比较两种方法提取的DNA进行PCR检测的效果。
2.2 蛋白酶K消化时间对蛋白酶K消化时间进行优化,在确保PCR结果的情况下选择适合的蛋白酶K消化时间2.3 PCR反应条件优化对退火温度,延伸时间,退火时间等PCR反应条件进行优化2.4血液保存条件的优化对抗凝剂的选择、血液的保存时间、血液的选择进行优化。
3. 研究的方法与方案
研究的目标、内容和拟解决的关键问题1. 研究目标优化DNA提取方法,优化PCR反应条件,最终实现巴贝斯虫PCR快速检测。
2.研究内容2.1 DNA提取方法优化采用两种方法提取DNA,一种用蛋白酶K和苯酚提取高分子量DNA,另一种哺乳动物DNA的快速分离方法,比较两种方法提取的DNA进行PCR检测的效果。
2.2 蛋白酶K消化时间对蛋白酶K消化时间进行优化,在确保PCR结果的情况下选择适合的蛋白酶K消化时间2.3 PCR反应条件优化对退火温度,延伸时间,退火时间等PCR反应条件进行优化2.4血液保存条件的优化对抗凝剂的选择、血液的保存时间、血液的选择进行优化。
4. 研究创新点
特色或创新之处本试验通过控制实验变量来探讨检测结果的优化,旨在优化犬巴贝斯虫的检测时间及程序,为进一步研究创新犬猫巴贝斯虫的诊断方面提供参考。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016年9月至11月,学生通过兽医院门诊实习 收集血样以及病历。
2016年11月至3月,在老师指导下完成DNA提取、PCR扩增以及凝胶电泳等实验,进行毕业设计的后续实验,整理相关资料和实验数据,完成中期汇报,并进行论文的撰写。
2016年3月,撰写毕业设计准备答辩。
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