芦丁缓解鸡肝细胞氧化应激及其作用机制开题报告

 2023-02-19 12:39:16

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

意义:

芦丁,又称为芸香甙,维生素P等,是黄酮醇配糖体,其在自然界存在于多种植物之中,例如存在于荞麦,蔓越莓柑橘类水果中,目前,其主要运用于食用抗氧化剂和营业增强剂,它在草药,多种维生素的制备中用作修复剂,并可以减少一些疾病的发生。

鸡肝脏具有消化、合成、免疫、解毒、贮藏和调节的功能,是鸡体内的进行物质代谢的重要场所,蛋白质、脂肪和糖类代谢大都在肝脏内进行,由此可见,肝脏是鸡的一个至关重要的器官,因此,在生产实践中对鸡肝脏的保护尤为重要。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标:

本课题目的在于阐明芦丁是否可以减轻鸡肝细胞的氧化应激以及其可能的作用机制,若芦丁的效果明显,则可以说明芦丁能运用于鸡养殖的生产实践中,作为一种饲料添加剂,对鸡的肝脏进行有效保护

2.研究内容:

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3. 研究的方法与方案

方法;1.细胞存活率实验 取适合新鲜鸡肝脏进行消化、离心、重悬、计数后,取适量细胞数接种于 96 孔板中,培养过夜,分为两大组,第一大组为空白对照组、H2O2 诱导模型组、H2O2 5 μmol/L 芦丁组、H2O2 10 μmol/L 芦丁组、H2O2 20 μmol/L 芦丁组,第二大组为空白对照组、LPS诱导模型组、LPS 5 μmol/L 芦丁组、LPS 10 μmol/L 芦丁组、LPS 20 μmol/L 芦丁组,培养 24 h 后吸干旧培养基,每孔加入 100 μL 含 10 μL CCK8 试剂的完全培养基,继续于 37 ℃、5 %CO2 培养箱中孵育 1 h,然后在波长 450 nm 处的酶标仪中测定每孔吸光度值。

2.细胞匀浆 MDA、CAT及 ROS 检测 取合适鸡肝脏细胞进行消化、离心、重悬、计数后,取适量细胞数接种于 6 孔板中,培养过夜,分为两大组,第一大组为空白对照组、H2O2 诱导模型组、H2O2 5 μmol/L 芦丁组、H2O2 10 μmol/L 芦丁组、H2O2 20 μmol/L 芦丁组,第二大组为空白对照组、LPS诱导模型组、LPS 5 μmol/L 芦丁组、LPS 10 μmol/L 芦丁组、LPS 20 μmol/L 芦丁组,于 37 ℃、5%CO2培养箱中培养 24 h 后,收集细胞制备成匀浆,按照试剂盒操作说明书进行 MDA、CAT水平及 ROS活性检测。

3检测Caspase-3、Bcl-2、BAX以及Keap1蛋白表达水平 取合适鸡肝脏细胞进行消化、离心、重悬、计数后,取适量细胞数接种于6 孔板中,培养过夜,分为两大组,第一大组为空白对照组、H2O2 诱导模型组、H2O2 5 μmol/L 芦丁组、H2O2 10 μmol/L 芦丁组、H2O2 20 μmol/L 芦丁组,第二大组为空白对照组、LPS诱导模型组、LPS 5 μmol/L 芦丁组、LPS 10 μmol/L 芦丁组、LPS 20 μmol/L 芦丁组,于 37 ℃、5%CO2培养箱中培养 24 h 后,收集细胞、裂解、离心、收集上清、检测蛋白浓度。然后每孔上样量 50 μg,进行电泳分析、转膜、封闭、孵育一抗过夜、洗膜、孵育二抗、洗膜及蛋白表达分析。

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4. 研究创新点

特色或创新之处

本课题目的在于阐明芦丁是否可以减轻鸡肝细胞的氧化应激以及其可能的作用机制,若芦丁的效果明显,则可以说明芦丁能运用于鸡养殖的生产实践中,作为一种饲料添加剂,对鸡的肝脏进行有效保护。探究芦丁是否能降低氧化应激对鸡肝脏造成的损伤,从而对鸡养殖业的生产实践提供相关的理论支持。

并且,芦丁广泛存在于多种植物之中,这些植物十分常见,例如:芸香叶、烟叶、枣、杏、橙皮、番茄、荞麦花等,其来源广泛,成本较低,若其有效,则可以作为一个性价比较高的饲料添加剂,用于鸡生产养殖行业中,从而推动养殖业的发展,符合当前质量兴农,科技兴农的政策要求。

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5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

2019.7月15日-8月15日:挑选合适的鸡群,采样

2019.8月14日-8月21日:方案论证,确定方案

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