小鼠卵母细胞中CXCR3基因的表达与功能初探开题报告

 2023-02-19 12:39:16

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.现状分析

CXCR3又称G蛋白偶联受体9(GPR9)和CD183,是趋化因子CXC亚族的受体,基因定位于X染色体长臂13区(Xq13),是一种七次跨膜的G蛋白偶联受体,属于七次跨膜受体家族(STSR-F),该受体是单链分子,由短的N端胞外区、长的跨膜区和短的C端胞内区组成。长的跨膜区来回7次穿过细胞膜,形成三个短的胞外环和三个胞内环。膜内侧受体可以与GTP结合蛋白相连接,启动下游信号转导。含有N-末端和三个胞外环(ECL1~3)的胞外区则负责与配体结合,cDNA全长1104bp,编码368个氨基酸,分子量约为41kD[1, 2]

CXCR3在多种不同的细胞上表达,它的生物学功能取决于它所表达的细胞包括CD4 T细胞、CD8 T细胞、自然杀伤细胞和B细胞,其中CD8 T细胞上表达最多见[3]。目前已发现三种剪接变体,分别为CXCR3-A(即通常所说的CXCR3)、CXCR3-B及CXCR3-alt[4]。CXCR3-B主要表达于血管内皮细胞,cDNA全长1248bp,其肽链的N端比CXCR3-A多出51个氨基酸,其余序列与CXCR3-A完全相同。CXCR3-alt是由基因转录后外显子跳跃产生的,功能活性有所降低,但可以由CXCL11/I-TAC介导趋化效应,活性降低的主要原因是其表达水平比CXCR3-A低[5]

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

1.1明确CXCR3蛋白在小鼠卵母细胞中的表达模式。

1.2 阐明CXCR3基因对卵母细胞成熟的影响。

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3. 研究的方法与方案

1研究方法

本试验选用小鼠的卵母细胞作为研究对象。

(1)利用RT-PCR、Western Blot、免疫荧光技术检测CXCR3的表达和定位

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4. 研究创新点

1.目前国内外对于CXCR3在减数分裂卵母细胞中的定位还未见报道,本试验首次尝试用免疫荧光技术定位CXCR3蛋白在卵母细胞中的位置分布。

2.目前关于CXCR3在自身免疫病、恶性肿瘤等医学疾病领域上的研究已取得很大进展,但对于CXCR3在卵母细胞减数分裂成熟过程中的影响还存在空白,本试验期望通过细胞实验来探究CXCR3对卵母细胞成熟的影响。

5. 研究计划与进展

1、研究计划

课题申请人在2019年10月就进入实验室学习卵母细胞相关实验技术,并在指导教师的指导下确立了研究内容。申请人根据本课题的研究内容需求,查找了国内外有关资料,了解了CXCR3基因、趋化因子、卵母细胞体外成熟等相关的理论基础和研究现状,并确定了研究路线。在实验室学习过程中,申请人已逐渐熟悉了实验的思路,并学习了卵母细胞体外培养、卵母细胞切片做等基本操作技术。接下来导师将指导申请人设计补充实验,使实验内容更完整,得出更完善的结果。

2、实验预期进展为:

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