1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.国内外研究概况
我国绵羊绝大多数为季节性发情品种,只有极少数为常年发情品种[1]。湖羊是世界闻名的多羔品种,具有四季发情,繁殖率高,成熟早,生长快等优点,是研究多胎性能及调控机制的理想对象。绵羊的多胎性与排卵率密切相关。目前已发现的与排卵率相关的主效基因有BMP家族基因如BMPR-IB、BMP15[2]和 GDF9[3]等。同时绵羊的季节性发情也受到主效基因的调控,目前发现的与季节性发情相关的基因有KISS1、D1O3、RFRP3和DIO2基因等[1]。
NR5A2基因是NR5A家族基因成员之一,是一种肝受体同系物(Liver receptor homolog 1,LRH-1),也是一种重要的孤儿核受体,其在各种组织中均有表达,特别是在卵巢中高表达[4]。Duggavathi等研究发现NR5A2基因敲除小鼠卵巢上虽有卵泡发育, 但未有卵泡破裂排卵, 如采用超排处理, 仍未见卵子排出的现象, 表明该基因与动物的卵泡发育及卵子成熟有关[5]。Higashiyama等在小鼠卵巢和睾丸中检测到有较强的表达信号, 表明NR5A2在雄性和雌性动物繁殖系统中具有重要的作用[6]。Li[7]等研究发现湖羊卵巢NR5A2 mRNA水平与排卵率和产仔数呈正相关;同时在NR5A2的编码序列中检测到两个单核苷酸多态性(T40C和T1419C)。表明NR5A2参与调控湖羊的高繁殖力性状。
2. 研究的基本内容和问题
研究内容
本项目有以下2方面研究内容:
1.湖羊NR5A2基因3’UTR序列扩增;
3. 研究的方法与方案
一、研究方法
1.RNA提取试剂盒(百泰克生物)提取RNA:
磨碎湖羊卵巢样品加裂解液匀浆后,依次加入氯仿、乙醇、漂洗液RW和去蛋白液RE经过孵育、离心等操作处理,最后加入RNase-free water离心洗脱得到RNA。
4. 研究创新点
特色或创新之处
首次克隆获得湖羊NR5A2基因3’UTR序列,分析其序列特征,并对其上存在的miRNA结合位点进行预测,为今后进一步研究NR5A2基因3’UTR功能及其在调控湖羊繁殖力相关性状上的作用奠定基础。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
2019.07- 2019.11:完成NR5A2基因3’UTR序列克隆试验;
2019.01- 2020.02:完成NR5A2基因3’UTR序列miRNA结合位点预测;
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