HDAC3在控制卵子老化过程中的作用开题报告

 2023-02-19 12:39:31

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.本课题的意义

卵母细胞发育成熟对雌性动物繁殖过程有着重要影响。近半个世纪以来,不孕症的发生概率持续升高,现已成为全球性的社会问题之一。卵巢的储备功能下降是导致高龄妇女不孕和生殖力低下的其中一个原因,主要表现为卵子质量下降和卵子数量减少。卵母细胞成熟排卵后若没有受精,其细胞质和细胞核会发生一系列变化,最终使得卵母细胞老化凋亡。老化卵子的受精和发育能力都明显低于正常卵,甚至可能发生无法受精的情况,即使是受精,其产生的后代也较正常卵繁殖力更低、寿命更短。另一方面,卵母细胞的老化也使得雌性动物的妊娠率降低,流产率增加,并造成出生缺陷。因此,进一步研究卵母细胞发育调控的分子机制,老化过程中卵母细胞的变化,探寻延缓卵母细胞老化的有效方法,将有利于改善卵母细胞体外成熟体系和受精系统,完善辅助生殖技术,减少出生缺陷。本课题旨在通过一些细胞生物学方法来初步鉴定HDAC3在控制小鼠卵母细胞老化中的作用,为探索改善卵子质量、预防生殖疾病和出生缺陷提供可能途径。

2.国内外的研究进展

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标

1、用Western Blot 和免疫荧光技术,观察和检测老化卵子中HDAC3水平的变化。

2、如果HDAC3蛋白水平有变化,我们将利用过表达或者siRNA技术改变其表达水平,来检测HDAC3在老化卵子成熟过程中的作用,包括,减数分裂成熟装置(如染色体、纺锤体等)和染色体整倍性,,进而探讨HDAC3在老化卵母细胞成熟中的作用。

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3. 研究的方法与方案

1.研究方法

1、取42周的小鼠GV期卵母细胞,在培养液中培养0h(GV期)和14h(MII),用Western blot 和免疫荧光技术观察并检测HDAC3在小鼠卵母细胞发育过程中的定位和表达情况。同时用3周龄的雌性小鼠卵母细胞作对照。

2、根据HDAC3在老化小鼠卵母细胞中的变化情况,采用过表达或siRNA技术改变其表达水平,进而研究该蛋白在老化卵子中的作用,包括纺锤体变化和染色体整倍性变化和动粒微管连接等。

2.技术路线

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4. 研究创新点

HDAC3是一种普遍存在的蛋白,但是人们对于其在卵母细胞成熟过程中的作用有一定的了解,但仍比较匮乏。本课题从组蛋白乙酰化修饰方面,首次通过HDAC3在老化小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用,探讨HDAC3对卵母细胞的减数分裂调控机制。

5. 研究计划与进展

2019年9月至2019年12月:熟练掌握小鼠卵母细胞的采集以及体外成熟培养,免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜的使用等操作技术。

2020年3月至2020年5月:完成全部主体实验。

2020年4月至2020年5月:本科生毕业论文撰写,并准备答辩等相关事宜

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