1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
酶制剂在制药及食品工业中应用十分广泛,不仅具有绿色环保和可持续发展的特性,且酶催化技术具有选择性高、效率高、污染低等优势,是绿色制药技术的重要发展方向,以绿色酶法技术替代高污染的化学法技术备受关注。
青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)是生物催化合成青霉素类和头孢菌素类等β-内酰胺抗生素的重要工业用酶,主要用于催化SSBA的合成。
定向进化通过建立突变体文库与高通量筛选方法,快速提升蛋白的特定性质,是目前蛋白质工程最为常用的蛋白质设计改造策略。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1、实验方法:以实验室已经筛选的木糖无色杆菌来源的青霉素G酰化酶(PGA)为基础,从所读文献中查找高效合成Cefprozil的工艺,设计合适生物酶法合成方案,(半)理性设计PGA以获得合成效率显著提高的突变体,并对其动力学参数探究,采用分子对接进行机理解析。
2、实验内容及要求1,应用薛定谔软件将Cefprozil与野生型进行分子对接,确定在催化通道中相关的氨基酸残基;2,对相关氨基酸进行丙氨酸扫描确定关键位点;3,对关键位点进行饱和突变以及迭代突变筛选最佳突变体;4,解析突变后蛋白空间结构的变化以及相关残基作用力的变化。
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