1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文献综述1.引言人血清白蛋白(HSA)是人血浆中最丰富的蛋白(40-50 g/L),是一种亲水性、非糖基化蛋白,分子量约为66.5 kDa。
HSA是在肝脏中合成的,主要作用是调节血浆胶体的嗜酸压力,以及作为许多外源性和内源性代谢物和药物[1]的载体。
该蛋白在临床上广泛用于治疗低蛋白血症、胎儿成红细胞症、烧伤或失水休克、肝硬化引起的腹水等[2-4]。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1.本课题要研究的内容基于毕赤酵母易于培养,生长速度快,可进行高密度连续发酵的特性,以分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母为出发菌株,通过高密度发酵的方式,优化发酵工艺,最终提升目标蛋白的产量。
2.采取的实验手段(1)构建可分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母 通过菌落PCR、质粒构建、电击转化等实验方法构建出所需的重组毕赤酵母。
(2)以构建的可分泌表达人血清白蛋白的重组毕赤酵母为出发菌株,通过摇瓶发酵确定产量最高的2-3株重组菌株将培养好的重组菌株转入BMGY培养基中以适宜的条件进行摇瓶发酵,每隔24h补充甲醇并取样测定OD600、胞外蛋白浓度、跑蛋白胶,以筛选产量较高的菌株。
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