1. 研究目的与意义
内容：开心散由人参、石菖蒲、远志、茯苓四味药组成，为我国传统医学益气养心、安神定志的代表方剂。君药[1]人参补心气、安心神，主要成分为人参皂苷；臣药茯苓宁
心安神、健脾利湿，主要成分为茯苓多糖和茯苓酸；佐药远志安神益智、行气散郁，主要成分为远志口山酮Ⅲ和远志皂苷；使药石菖蒲开心窍、醒神明，主要成分为挥发油类如α-细辛醚和β-细辛醚等。本课题旨在建立以人参、石菖蒲、远志和茯苓中有效成分为标示性成分的质量标准，主要研究包括以下几个方面：
一、制剂鉴别
2. 文献综述
开心散有效成分及应用的研究进展
胡 云 南京中医药大学
摘 要：开心散由人参、远志、菖蒲、茯苓四味中药组成，善治好忘，具宁心安神、健脾益智之功效。主要的活性成分有人参皂苷、远志皂苷、寡糖酯、细辛醚、茯苓酸、茯苓多糖等。研究表明，开心散具有抗抑郁、抗痴呆、改善学习记忆、抗疲劳等作用。本文通过检索近年来国内外有关开心散的文献，对开心散中各成分的活性成分、作用机制研究及现代应用进行总结归纳。
3. 设计方案和技术路线
研究方案：
一、鉴别
参照2015版药典一部中石菖蒲药材和远志药材的鉴别方法，采用薄层色谱法进行鉴别。
1.石菖蒲的鉴别
样品、对照药材、阴性对照品分别取0.2g，加石油醚（60～90℃）20ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚（60～90℃）1ml复溶得供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，置紫外光灯（365nm）下检视。再以碘蒸气熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
2.远志的鉴别
2.1以远志山酮Ⅲ为标示性成分 样品、阴性对照品加70%甲醇20ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml复溶得供试品溶液、阴性对照溶液。取远志山酮Ⅲ对照品，加甲醇制成每1ml含0.5g的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照无此斑点。
2.2以远志皂苷为标示性成分 样品、阴性对照品加70%甲醇100ml，称重，超声（400W）1h，放冷，称重，加70%甲醇补足失重，摇匀，滤过，取滤液50ml蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液50ml，加热回流2h，放冷，用盐酸调节pH至4-5，加水饱和正丁醇萃取三次，每次50ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得供试品溶液、阴性对照溶液。取细叶远志皂苷对照品1mg，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6:3:0.5）为展开剂，展开，喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
二、检查
参照2015版药典四部中胶囊剂的检查项下方法，中药中药硬胶囊剂需进行水分、装量差异、崩解时限检查。
1.水分：照水分测定法（通则0832）测定，除另有规定外，不得过9.0%。
2.装量差异：取开心散胶囊10粒，精密测定，倾出内容物（不得损坏囊壳），囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净；再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量与平均装量。每粒装量与平均装量相比较（有标示装量的胶囊剂，每粒装量应与标示装量 比较），超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。中药胶囊不得超过装量差异限度10%。
3.崩解时限：除另有规定外，照崩解时限检测法（通则0921）检查，硬胶囊应在30分钟内全部崩解。
三、含量测定
1.方法学考察
参照2015版药典四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则，需考察专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、加样回收率等。
1.1色谱条件
色谱柱：C18柱；检测器：紫外；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量：10μl。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0～35 | 19 | 81 |
35～55 | 19→29 | 81→71 |
55～70 | 29 | 71 |
70～100 | 29→40 | 71→60 |
1.2溶液的制备
A.供试品溶液制备：取胶囊粉末10g，精密称定，加三氯甲烷50ml，超声1h，过滤，弃去三氯甲烷液，挥干溶剂，连同滤纸一起转移到100ml锥形瓶中，密塞，放置过夜。精密加入50ml水饱和正丁醇，超声（250W）1h，滤过，精密量取40ml，旋干，加甲醇溶解，定容至5ml。
B.对照品储备液配制：精密称取人参皂苷对照品Rg1、Re、Rb1 10mg，分别加甲醇定容至5ml，精密取Rg1溶液1ml、Re溶液2.5ml、Rb1溶液0.5ml，定容至5ml，作为对照品储备液。
C.对照品溶液：精密称取人参皂苷对照品Rg1、Re、Rb1各1mg，加甲醇定容至5ml，制成每1ml各含0.2mg的混合溶液。
D.阴性溶液制备：按胶囊组方，制备缺人参阴性对照品，并照供试品溶液制备项下方法制成阴性对照品溶液。
1.3专属性：在上述色谱条件下，样品、对照品、阴性对照各进样10μl，观察样品峰的保留时间处是否有杂质峰。
1.4线性：将对照品储备液逐级稀释配成5个溶液，分别取各10μl进样分析，以浓度（mg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。
1.5精密度：取中间浓度的对照品溶液日内连续进6针，连续3天各进1针，计算峰面积RSD值是否小于3%。
1.6重复性：平行6份进行测定，计算含量RSD，看是否小于5%。
1.7稳定性：取同一批次样品分别在0、2、4、6、8、12h进样，计算峰面积RSD，看是否小于3%。
1.8加样回收率：精密称取一半量的药品，加入一半浓度对照品，照供试品溶液制备项下方法提取，平行6份，计算回收率及回收率的RSD，看是否小于5%。
2.人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量测定
参照2015版药典一部中人参药材中含量测定方法，采用高效液相色谱法进行测定
在上述色谱条件下，将3个批次的样品进样，按干燥品计算含量，看是否符合药典规定。（Rg1和Re含量和不少于0.3%，Rb1含量不少于0.2%）
技术路线：
4. 工作计划
1.2022年12底，拟定论文题目
2.2022年1月，查阅药典及文献，完成实验方案
3.2022年2月中旬-2月底，完成文献综述和开题报告
5. 难点与创新点
1.首次对开心散胶囊的质量标准进行研究，目前研究较多的都是开心散的药理学作用及作用机制研究
2.首次以远志的两种有效成分作为标示性成分进行鉴别，使得远志的鉴别结果更加准确可靠
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